解惑：该如何对待脆弱的SARS-CoV2 N蛋白？

千锤百炼，精益求精！

今天刘老师和大家唠唠SARS-CoV2 N蛋白那点事。

过去的5个月，IVD圈对新冠抗体检测的认识不断的加深。一开始，大家全搞N抗体检测，为啥呢？因为N蛋白好做啊！原核表达，产量、纯度也还不错，再加上N蛋白在病毒内丰度本身就很高，这不是完美的biomarker嘛！然而，事与愿违，大家伙一做，发现N蛋白全是坑啊！然后，众所周知的，大家都去搞RBD了。再然后，大伙又发现，不加N还是不成，漏检太厉害。所以，今天咱就好好说说N蛋白的坑。

1号坑：关于N蛋白的浓度——你以为你以为的就是你以为的吗？

自己做过N蛋白表达的都知道，N蛋白的表达量，那看着是贼高啊！轻轻松松的几百mg/L的产量。但是如果你去用BCA做个定量，你一定会发现得出的浓度和OD280算出来的差老多了，这是为毛啊？

别慌，您去看看您的OD260/280, 是不是远远高于0.57（純蛋白的比值）了？

一般而言，对于N蛋白，您什么处理都不做，直接这么纯化，得到的OD260/280一般都在1.0以上。那这是为什么呢？其实道理很简单，N蛋白是核蛋白，本来就是结合RNA的，所以呢，纯化过程中很可能缠绕着大量的核酸（RNA和DNA）。这样，我们的得到的其实并不是純蛋白，而是N蛋白与核酸的复合物。N蛋白上带着核酸，这不仅会影响N蛋白的纯度，更重要的是，核酸会干扰N蛋白与抗体的结合，因此会影响灵敏度或特异性。

总之，要想纯化的到純的N蛋白，还是需要下一番功夫的。听到这，市场上200/mg的N蛋白，您还敢买吗？记住，要想选一个基本合格的N蛋白（注意，仅仅是最低要求，基本合格而已），您不仅要看供应商提供的SDS-PAGE，更要自己测测OD260/280，如果这个数大于0.7了，那就退货吧。

2号坑：关于N蛋白的稳定性——颜值不够，化妆来凑！

废话不多讲，N蛋白，自身稳定性非常的差。

那差到什么程度呢？

差到……（1）制剂里必须要加高盐（>150mM NaCl）还不能冻-20或者-80，不然必然沉淀！（2）你冻起来吧，它沉淀；不冻起来吧，它会降解——且是不可抑制的自水解！

这就麻烦了，一个蛋白这么不稳定，那怎么用啊？

莫慌，经过5个月的不懈努力，百新意N抗原历经4代22种，终于筛选出了最佳品种——NX(2020T7X)。该抗原不仅金标简单稳定，特异性灵敏度优异，且特异性奇佳(＞99%)。近期，NX制剂配方升级后可长期保存在-80，-20，且反复冻融不会产生沉淀（看下图的对比，制剂过后的NX，及时经过-80反复冻融，依然清澈如许啊！）。4度保存2个月其品质亦完好如初。

左：未制剂NX-80冻存24小时 中: 0.3%添加剂NX--80冻存24小时右1%添加剂NX--80冻存24小时

划重点，凡是说自己的N蛋白不放盐的，要么是骗子，要么卖假货！

3号坑：关于N蛋白的非特异——与生俱来，但并非无药可治！

抛开外在因素不提，根据17年前科学家们对SARS N蛋白的研究，新冠N蛋白的非特异主要来源于其N端。

所以，干掉N端，就去掉了一大半非特异。

但是，仅仅留下C端，这么小的蛋白，可不好用啊。

所以，百新意就创造了NX——C端融合蛋白。该蛋白不仅灵敏度高，且非特异极低（下图有真相）。

上：NX特异性与灵敏度检测 下左：NX特异性检测 下右：NX的SDS-PAGE

4号坑：关于N蛋白的金标条件——NX它不香吗？

N蛋白金标有点困难。首先，N蛋白表面分布着几十个Lys，这给金标带来了比较大的麻烦。

左：N蛋白N端结构域 右：N蛋白C端结构域 黄色的毛毛虫样的分子是Lys

其次，前面咱们讲到了，N蛋白制剂，必须要放盐，而这无疑是给本就不好标记的N蛋白雪上加霜。

N蛋白可得多撒点盐

那，这咋整啊？

莫慌，接下来公布答案。

第一，要选百新意的NX。这不是广告，这很重要! NX 是一个经过优化的N蛋白，其不仅保留了N全长的蛋白的灵敏，还极大消除了N蛋白的非特异，更重要的是，这个蛋白很容易金标啊！

第二， 标记条件和标记结果，看下面这图应该就明白了吧。下边打印的数字，是指1ml金标体系中，加多少0.2M的K2CO3。

NX的金标条件与金标效果

总结一下，NX具有（1）特异性极好（2）灵敏度高（3）稳定（4）易于金标等四大优势。百新意的NX产能充足（周产能6-10g），质量稳定，目前已供给多家大型企业的层析和发光生产线。

百新意新冠抗体检测搭配

捕获（三线条）法与间接法——NX（2020T7X）+RBD his（2020T4）

双抗原夹心法：RBD his（2020T4）金标+RBD-hFc（2020T4h）

百新意新冠产品列表